黑色素（melanin）elisa科研试剂盒操作流程及注意事项

黑色素（melanin）elisa试剂盒操作流程及注意事项

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一、操作流程

1. 试剂准备

- 提前将所有试剂平衡至室温（20-25℃），避免剧烈震荡。

- 按说明书配制洗涤液（如10×浓缩液需用蒸馏水稀释）。

2. 样本处理

- 组织/细胞样本：加入裂解液（如RIPA）匀浆，离心（12,000 rpm，10 min）取上清。

- 血清/血浆：离心（3,000 rpm，10 min）去除沉淀，避免溶血或脂血。

- 保存：短期4℃保存，长期需分装存于-80℃，避免反复冻融。

3. 标准品稀释

- 将标准品按梯度稀释（如0、10、50、100、200 ng/mL），建立标准曲线，现用现配。

4. 加样

- 标准孔：依次加入不同浓度标准品。

- 样本孔：加入处理后的样本10ul,再加样本稀释液40ul,空白孔不加。

- 避免气泡，每孔换新吸头以防交叉污染。

5. 孵育

- 37℃孵育30-60分钟（时间依说明书），避免震动和强光。

6. 洗涤

- 弃液后每孔加满洗涤液，静置30秒后倒出，拍干。重复3-5次，确保充分洗涤。

7. 加酶标抗体

- 每孔加入HRP标记抗体（按说明书体积），37℃孵育30分钟，再次洗涤。

8. 显色

- 加入TMB显色底物（50-100 μL/孔），避光室温反应10-15分钟，溶液变蓝色。

9. 终止反应

- 加入终止液（如2M硫酸，50 μL/孔），颜色变为黄色，立即进入检测。

10. 检测

- 酶标仪450 nm波长测OD值（建议用620 nm双波长校正背景）。

11. 数据分析

- 以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线，计算样本浓度（考虑稀释倍数）。

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二、注意事项

1. 试剂与样本 - 试剂使用前需充分混匀，避免反复冻融（尤其酶标试剂）。

- 样本避免反复冻融，处理时防止污染（如蛋白酶或细菌污染）。

2. 操作细节

- 加样精准，避免触碰孔壁或产生气泡。

- 严格控制孵育时间和温度，洗涤彻底以防假阳性/阴性。

- 显色时间需精确，强光下需避光操作。

3. 干扰因素

- 避免使用溶血、脂血或高浓度胆红素样本。

- 若样本浓度超出标准曲线范围，需稀释后复测。

4. 质控与安全

- 每次实验需重做标准曲线，不同批号试剂勿混用。

- 终止液含腐蚀性成分，需佩戴手套、护目镜操作，废液按生物危害处理。

5. 设备与环境

- 确保酶标仪滤光片波长正确，环境温度稳定（20-25℃）。

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附：常见问题处理 - 高背景：检查洗涤是否充分或样本是否过度稀释。 - 标准曲线线性差：确认标准品稀释准确性及酶标板密封性。 遵循试剂盒说明书具体步骤，并结合实际实验条件优化操作。如有异常结果，建议重复实验或联系技术支持。