细胞培养中支原体污染的预防及处理

支原体污染是细胞培养中常见的问题之一，它不仅会影响细胞生长和实验结果，还可能对实验室人员的健康造成威胁。以下是一些预防和处理支原体污染的措施：

预防措施：

1. 严格的无菌操作：
- 在生物安全柜中进行所有细胞培养操作，使用无菌的工具和试剂，避免接触污染源。

2. 使用过滤灭菌的培养基和补充液：
- 所有进入培养箱的培养基、血清、抗生素等补充液都应经过0.22微米或0.45微米的过滤膜过滤灭菌，以去除潜在的支原体污染。

3. 定期检查和维护设备：
- 定期清洁和维护细胞培养箱，确保其内部环境清洁无菌，避免支原体在培养箱内生存和繁殖。

4. 使用抗生素：
- 在培养基中添加适量的抗生素，如青霉素和链霉素，可以预防细菌污染，但对于支原体的预防效果有限，且长期使用可能导致耐药性问题。

5. 限制人员进出：
- 限制实验室人员的进出，特别是外来人员，以减少污染的风险。

6. 使用无菌水源：
- 使用经过净化处理的水进行细胞培养，避免使用自来水或未经处理的水源。

处理措施：

1. 立即隔离污染细胞：
- 一旦发现细胞培养中出现支原体污染的迹象，如细胞形态改变、生长缓慢、产生气泡等，应立即停止实验，将污染的细胞培养瓶隔离，避免污染扩散。

2. 重新建立细胞株：
- 如果可能，尝试从未受污染的细胞冻存库存中复苏新的细胞株，重新开始培养。

3. 彻底清洁和消毒：
- 对受污染的细胞培养设施进行彻底清洁和消毒，包括工作台、培养箱、移液器等，使用适当的消毒剂，如70%酒精或1%漂白粉溶液。

4. 加强无菌操作：
- 在处理污染后，加强无菌操作规程的执行，确保所有操作都在无菌条件下进行。

5. 重新评估实验方案：
- 重新评估实验方案和操作流程，找出可能的污染源，并采取措施防止未来的污染。

通过实施这些预防和处理措施，可以显著降低细胞培养中支原体污染的风险，保障实验的顺利进行和实验室的安全。