elisa实验中包被的抗原抗体

在ELISA（酶联免疫吸附测定）实验中，包被（blocking）步骤通常是指将微孔板表面的抗原或抗体与样本中的相应抗体或抗原结合的过程。这一步骤的目的是为了减少非特异性结合，提高实验的特异性和灵敏度。
1. 包被抗原：
   - 在检测特定抗体的情况下，微孔板会被事先包被上相应的抗原。这个抗原是想要检测的免疫反应的目标。
   - 例如，在乙型肝炎病毒（HBV）抗原抗体检测的ELISA中，微孔板可能会被HBsAg（乙型肝炎表面抗原）包被，以便检测血清中的抗-HBs（乙型肝炎表面抗体）。
2. 包被抗体：
   - 在检测特定抗原的情况下，微孔板会被包被上特异性抗体。
   - 例如，在某些肿瘤标志物如CA125的ELISA检测中，微孔板会包被上针对CA125的抗体。
包被过程通常包括以下步骤：
   - 微孔板清洗后，用包被缓冲液（通常含有pH值、盐浓度和可能的添加剂，如叠氮化钠）稀释抗原或抗体。
   - 将稀释后的抗原或抗体溶液置于微孔板中，在适当的温度（通常是37°C）下孵育一定时间（如1小时），让抗原或抗体充分结合到微孔板表面。
   - 孵育后，用洗涤液清洗微孔板，以去除未结合的抗原或抗体。

包被是ELISA实验中的关键步骤，因为它直接影响到后续步骤中样本与酶标记抗体或抗原的结合效率和特异性。因此，正确执行包被步骤对于获得可靠和准确的结果至关重要。

ELISA试剂盒实验包被用抗体应具有高亲和力和高特异性，可取材于抗血清或含单克隆抗体的腹水或培养液。如免疫用抗原中含有杂质（即便是极微量的），在抗血清中将出现杂抗体，必须除去（可用吸收法）后才能用于ELISA，以保证试验的特异性。抗血清不能直接用于包被，应先提取IgG，通常采用硫酸铵盐析和Sephadex凝胶过滤法。一般经硫酸铵盐析粗提的IgG已可用于包被，高度纯化的IgG性质不稳定。如需用高亲和力的抗体包被以提高试验的敏感性，则可采用亲和层析法以除去抗血清中含量较多的非特异性IgG。腹水中单抗的浓度较高，特异性亦较强，因此不需要作吸收和亲和层析处理，一般可将腹水作适当稀释后直接包被，必要时也可用纯化的IgG。应用单抗包被时应注意，一种单抗仅针对一种抗原决定簇，在某些情况下，用多种单抗混合包被，可取得更好的效果。