ELISA实验中的一些操作技巧

ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种广泛应用于生物学、医学科学等领域的免疫酶技术。为了保证实验结果的准确性，以下是一些在ELISA实验中需要注意的操作技巧：
1. 试剂盒的选择与准备：选择适合自己检测范围和灵敏度的试剂盒，并提前订购和准备试剂及耗材。
2. 样本处理：收集标本前需有一个完整的计划，清楚要检测的成份是否足够稳定。推荐新鲜标本尽早检测，如需周期收集，应及时分装并保存于-20或-70度。
3. 标准品溶解：准确复溶冻干标准品，并在冰上操作。标准品应严禁反复冻融。
4. 倍比稀释：事先准备好离心管、滤纸等材料，稀释时充分混匀，并采用进口或硅化的EP管，减少蛋白吸附。
5. 洗涤：ELISA实验中洗涤是非常重要的步骤，建议使用20倍稀释的洗液，并确保洗涤充分，避免洗涤不干净导致背景高。
6. 加样：ELISA实验中一般有5次加样，使用微量加样器并注意保养和定期校正。加样前需充分混匀溶液，加样时避免产生气泡，并确保每次加样顺序一致。
7. 孵育：为防止样品蒸发，将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。严格遵守给定的孵育时间和温度。
8. 洗板：洗涤过程中需将反应孔中残留的洗涤液在滤纸上充分拍干，避免将滤纸直接放入反应孔中吸水。
9. 反应时间的控制：加入底物后定时观察反应孔的颜色变化，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应。
10. 操作说明：封板膜只做一次性使用。如有需要，使用加液器进行样品稀释，并经常校对其准确性。
以上是ELISA实验中需要注意的一些操作技巧，希望对您有所帮助。