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常温细胞收货当天处理方式

1. 收到常温细胞后,及时拍照记录有无漏液/瓶身破损现象。

2. 镜下观察有无微生物污染现象,拍照记录不同倍数镜下细胞状态和有无染菌现象, 方便后续 售后处理。

3. 消毒后,更换赠送的完全培养液放置培养箱静止2-3小时。如细胞有多数悬浮细胞需要离心收集 重新接种止培养瓶。

4. 观察细胞密度若超过 80%则可正常传代处理(有的原代细胞不可传代,请根据实际情况决定), 初次传代推荐比例 1:2 到 1:3(按实际收货细胞密度决定,若不确定 可联系技术支持);若细胞密度不到 80%则可继续培养,注意拧松瓶盖或更换透气瓶盖;悬浮细胞注意离心所有培养基以收集细胞。

5. 由于气温,运输等影响造成贴壁细胞漂浮的,请将细胞离心收集后在离心管中消化后进行传代 ,或及时联系技术支持进行指导传代。

6. 该细胞对培养基及血清的质量要求较高,其中任何一个质量不好都会导致后续培养过程中细胞的 分化,特别是传3、4代以后细胞容易出现分化,细胞变大,贴壁较紧,呈典型“摊鸡蛋”样;

7. 该细胞在传代或复苏后,刚贴壁时会有短小的突触,但细胞胞体还是呈圆形或近圆形;待细胞培 养2-3天后,短小突触会消失;

8.如果用胰酶消化,经验不足时,极易导致后续细胞形态的改变,也不容易将细胞消化下来;

9.如果用细胞刮将细胞刮下来,容易导致大量细胞死亡和细胞形态的改变,也不容易分散为单细 胞;

10.该细胞不管在任何密度下,只要是更换了新鲜培养基后紧接着进行吹打,细胞会很难从培养瓶壁 上脱落。

推荐的传代方法有以下两种:

方法一:该细胞在细胞密度较大,培养基较黄时,不要去除旧培养基,用移液管直接对培养瓶壁 上的细胞进行吹打,使细胞从壁上脱落。细胞脱落后可加入新鲜的完全培养基混匀后分瓶;也可收 集培养瓶中的细胞悬液,离心后,,弃上清,再用新鲜的完全培养基重悬细胞后分瓶,进行培养。 这种方法容易出现的问题是,如果操作者经验不足,可能导致部分细胞无法脱落。

方法二:细胞密度达到80~90%,需要进行传代时,可在培养瓶中的原培养基中滴加1~2滴无菌的 HEPES缓冲液(视培养瓶中培养基的体积适当可以增加HEPES*的用量),作用1~205min,使培养基PH 变酸,培养基颜色变黄,直接用移液管进行吹打,这时细胞会很轻易脱落,并成单细胞。细胞脱落 后可加入新鲜的完全培养基混匀后分瓶;也可收集培养瓶中的细胞悬液,离心后,弃上清,再用新 鲜的完全培养基重悬细胞后分瓶,进行培养。